Assorbanza della fase mobile

Assorbanza della fase mobile
Topic LCI-USG-0021, Ultimo aggiornamento 11/21/2024

Consultare la seguente tabella per ottenere le assorbanze a diverse lunghezze d'onda per le fasi mobili utilizzate di frequente.

Per ridurre il rumore di fondo, scegliere la fase mobile con attenzione.

La fase mobile ottimale per l'applicazione in uso non assorbe in corrispondenza delle lunghezze d'onda di rivelazione selezionate. Verificare con tale fase mobile che qualsiasi assorbanza sia dovuta soltanto al campione. L'assorbanza della fase mobile riduce inoltre l'intervallo dinamico lineare del rivelatore di una quantità pari all'assorbanza che viene sottratta dalla funzione di azzeramento automatico. Lunghezza d'onda, pH e concentrazione della fase mobile incidono sull'assorbanza della fase mobile. Nella tabella che segue sono riportati esempi di varie fasi mobili con valori di assorbanza basati su un cammino ottico di 10 mm.

Nota: Quando si utilizzano solventi in fase diretta, installare il kit di conversione esano/THF di Waters relativo al proprio sistema (fare riferimento a Kit di compatibilità esano/THF di Waters).
Attenzione: Quando si utilizza Alliance iS Bio HPLC System a valori di pH superiori a 10, assicurarsi di utilizzare il kit opzionale per pH elevato. Per ulteriore assistenza, rivolgersi a Waters.
Tabella 1. Assorbanza della fase mobile misurata contro l'aria o l'acqua
Fase mobile Assorbanza (AU) alla lunghezza d'onda specificata (nm)
200 205 210 215 220 230 240 250 260 280
Solventi
ACN 0,05 0,03 0,02 0,01 0,01 < 0,01 n/a n/a n/a n/a
IPA 1,80 0,68 0,34 0,24 0,19 0,08 0,04 0,03 0,02 0,02
MeOH (degassificato) 1,91 0,76 0,35 0,21 0,15 0,06 0,02 < 0,01 n/a n/a
MeOH (non degassificato) 2,06 1,00 0,53 0,37 0,24 0,11 0,05 0,02 < 0,01 n/a
THF non stabilizzato (fresco) 2,44 2,57 2,31 1,80 1,54 0,94 0,42 0,21 0,09 0,05
THF non stabilizzato (vecchio) > 2,5 > 2,5 > 2,5 > 2,5 > 2,5 > 2,5 > 2,5 > 2,5 2,5 1,45
Acidi e basi
Acido acetico, 1% 2,61 2,63 2,61 2,43 2,17 0,87 0,14 0,01 < 0,01 n/a
Fosfato di diammonio, 50 mM 1,85 0,67 0,15 0,02 < 0,01 n/a n/a n/a n/a n/a
EDTA disodico, 1 mM 0,11 0,07 0,06 0,04 0,03 0,03 0,02 0,02 0,02 0,02
Acido cloridrico, 0,1% 0,11 0,02 < 0,01 n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a
Acido fosforico, 0,1% < 0,01 n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a
Trietilammina, 1% 2,33 2,42 2,50 2,45 2,37 1,96 0,50 0,12 0,04 < 0,01
Acido trifluoroacetico, 0,1% 1,20 0,78 0,54 0,34 0,22 0,06 < 0,02 < 0,01 n/a n/a
Tamponi e sali
Acetato di ammonio, 10 mM 1,88 0,94 0,53 0,29 0,15 0,02 < 0,01 n/a n/a n/a
Bicarbonato di ammonio, 10 mM 0,41 0,10 0,01 < 0,01 n/a n/a n/a n/a n/a n/a
HEPES, 10 mM, pH 7,6 2,45 2,50 2,37 2,08 1,50 0,29 0,03 < 0,01 n/a n/a
MES, 10 mM, pH 6,0 2,42 2,38 1,89 0,90 0,45 0,06 < 0,01 n/a n/a n/a
Fosfato di potassio, dibasico (K2HPO4), 10 mM 0,53 0,16 0,05 0,01 < 0,01 n/a n/a n/a n/a n/a
Fosfato di potassio, monobasico (KH2PO4), 10 mM 0,03 < 0,01 n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a
Acetato di sodio, 10 mM 1,85 0,96 0,52 0,30 0,15 0,03 < 0,01 n/a n/a n/a
Cloruro di sodio, 1 M 2,00 1,67 0,40 0,10 < 0,01 n/a n/a n/a n/a n/a
Citrato di sodio, 10 mM 2,48 2,84 2,31 2,02 1,49 0,54 0,12 0,03 0,02 0,01
Formiato di sodio, 10 mM 1,00 0,73 0,53 0,33 0.20 0,03 < 0,01 n/a n/a n/a
Fosfato di sodio, 100 mM, pH 6,8 1,99 0,75 0,19 0,06 0,02 0,01 0,01 0,01 0,01 < 0,01
Tris HCl, 20 mM, pH 7,0 1,40 0,77 0,28 0,10 0,04 < 0,01 n/a n/a n/a n/a
Tris HCl, 20 mM, pH 8,0 1,80 1,90 1,11 0,43 0,13 < 0,01 n/a n/a n/a n/a
Tensioattivi
Brij 35, 1% 0,06 0,03 0,02 0,02 0,02 0,01 < 0,01 n/a n/a n/a
CHAPS, 0,1% 2,40 2,32 1,48 0,80 0,40 0,08 0,04 0,02 0,02 0,01
Poliossietilene sorbitano monolaurato (Tween 20), 0,1% 0,21 0,14 0,11 0,10 0,09 0,06 0,05 0,04 0,04 0,03
Sodio dodecil solfato (SDS), 0,1% 0,02 0,01 < 0,01 n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a
Triton X-100, 0,1% 2,48 2,50 2,43 2,42 2,37 2,37 0,50 0,25 0,67 1,42
Reagenti Waters PIC
PIC A, 1 vial/L 0,67 0,29 0,13 0,05 0,03 0,02 0,02 0,02 0,02 < 0,01
PIC B6, 1 vial/L 2,46 2,50 2,42 2,25 1,83 0,63 0,07 < 0,01 n/a n/a
PIC B6, basso UV, 1 vial/L 0,01 < 0,01 n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a
PIC D4, 1 vial/L 0,03 0,03 0,03 0,03 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,01

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Per evitare il rischio di lesioni personali e danni alle apparecchiature da laboratorio, utilizzare sempre i prodotti Waters in conformità alle informazioni operative e di sicurezza applicabili, alle procedure operative standard della propria organizzazione e alle normative locali.

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