Per ridurre il rischio di carryover, attenersi alle linee guida relative ai solventi di lavaggio.
I solventi di lavaggio puliscono l'ago tra un'iniezione e l'altra e rimuovono le tracce del campione precedente. In genere sono più forti della fase mobile isocratica di un'applicazione e spesso più forti anche delle condizioni finali della fase mobile per una separazione in gradiente. Dal momento che non vengono iniettati in una colonna, la determinazione dei solventi di lavaggio adeguati non richiede, per qualsiasi finalità pratica, alcuna considerazione di carattere cromatografico.
Per ottenere prestazioni ottimali, attenersi alle linee guida descritte di seguito per selezionare i solventi di lavaggio. In caso contrario può aumentare il rischio di carryover. Tuttavia, queste linee guida non escludono altre combinazioni di solventi, ma in tal caso le prestazioni attese sono inferiori o è necessario manipolare i parametri di iniezione.
Nota: per evitare di danneggiare e intasare i componenti presenti nel circuito idraulico di lavaggio e spurgo, Waters raccomanda di non utilizzare tamponi o additivi non volatili come solventi di lavaggio.
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Importante: I solventi di lavaggio devono essere compatibili e miscibili sia con la fase mobile dell'applicazione che con i componenti del campione. Devono inoltre essere completamente solubili con la fase mobile e il campione e non devono causare precipitazione.
Utilizzare solventi di lavaggio che siano compatibili con le caratteristiche chimiche del campione e della fase mobile dell'applicazione.
- I solventi di lavaggio devono essere sufficientemente forti da disciogliere facilmente il campione e mantenere in seguito la solubilità.
- Per le condizioni cromatografiche in fase inversa acquosa tamponata, in genere si utilizza un solvente di lavaggio con un'elevata concentrazione di solvente organico, come ACN o MeOH dall'80% al 100% con la parte restante d'acqua.
Nota: Il titanio è soggetto a corrosione nel metanolo anidro, che può essere evitato aggiungendo una piccola quantità di acqua (circa il 3%). Una leggera corrosione è possibile con ammoniaca >10%. Se si utilizza Alliance iS Bio HPLC System, è possibile, in alternativa, rimuovere filtri a piombo in titanio (il sistema perde la prima linea di protezione dal particolato) o sostituirli con filtri a piombo in acciaio inossidabile se le considerazioni di biocompatibilità non incidono sull'analisi.
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Consigli per il solvente
