Consultez le tableau ci-dessous pour connaître les seuils d’absorbance approximatifs des solvants, tampons, détergents et phases mobiles.
Les concentrations de solvant représentées sont celles les plus fréquemment utilisées. Pour travailler avec des concentrations différentes, il est possible, avec la loi de Beer, de déterminer une absorbance approximative ; elle est proportionnelle à la concentration.
Remarques :
- Le seuil λ, ou seuil UV, correspond à la longueur d’onde à laquelle l’absorbance du solvant est égale à 1 UA.
- Procéder à la détection à une longueur d’onde proche ou inférieure à cette limite augmente le bruit de la ligne de base en raison de l’absorbance du solvant.
Tableau 1.
Limites de longueur d’onde pour diverses phases mobiles
| Phase mobile |
λ minimale, en nm |
| Acide acétique, 1 % |
230 |
| Acétate d'ammonium, 10 mM |
205 |
| Bicarbonate d'ammonium, 10 mM |
190 |
| 3-[(3-cholamidopropyl)-diméthylammonio]-1-propanesulfonate (CHAPS), 0,1 % |
215 |
| Phosphate de diammonium, 50 mM |
205 |
| EDTA disodique, 1 mM |
190 |
| Acide 4-(2-hydroxyéthyl)-1-pipérazine-éthanesulfonique (HEPES), 10 mM, pH 7,6 |
225 |
| Acide chlorhydrique, 0,1 % |
190 |
| Acide 2-(N-morpholino)éthanesulfonique (MES), 10 mM, pH 6,0 |
215 |
| 4-octylphénol polyéthoxylate (Triton X-100), 0,1 % |
240 |
| Éther laurique de polyoxyéthylène 35 (Brij 35), 0,1 % |
190 |
| Phosphate de potassium, dibasique, 10 mM |
190 |
| Phosphate de potassium, monobasique, 10 mM |
190 |
| Acétate de sodium, 10 mM |
205 |
| Chlorure de sodium, 1 M |
207 |
| Citrate de sodium, 10 mM |
225 |
| Dodécyle sulfate de sodium, 0,1 % |
190 |
| Formiate de sodium, 10 mM |
200 |
| Triéthylamine, 1 % |
235 |
| Acide trifluoroacétique, 0,1 % |
190 |
| Chlorhydrate de tris(hydroxyméthyl)aminométhane (Tris HCl), 20 mM, pH 7,0 |
202 |
| Tris HCl, 20 mM, pH 8,0 |
212 |
| Réactif A PIC (chromatographie d’appariement d’ions) de Waters, 1 flacon/litre |
200 |
| Réactif B-6 PIC de Waters, 1 flacon/L |
225 |
| Réactif B-6 PIC de Waters, faible UV, 1 flacon/L |
190 |
| Réactif D-4 PIC de Waters, 1 flacon/L |
190 |
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Sélection de la longueur d’onde
