Absorbance de la phase mobile

Topic LCI-USG-0021, Date de la dernière mise à jour 11/21/2024

Consultez le tableau ci-dessous pour connaître les absorbances, à différentes longueurs d’onde, des phases mobiles les plus utilisées.

Pour réduire le bruit de la ligne de base, choisissez soigneusement la phase mobile.

La phase mobile idéale est celle qui est transparente aux longueurs d'onde de détection sélectionnées. Avec une telle phase mobile, assurez-vous que toute absorbance est due uniquement à l'échantillon. L'absorbance par la phase mobile réduit également la plage dynamique linéaire du détecteur d'une valeur équivalente à la quantité d'absorbance annulée par la fonction de mise à zéro. La longueur d’onde, le pH ainsi que la concentration de la phase mobile affectent également son absorbance. Des exemples de phases mobiles sont proposés dans le tableau suivant, où les absorbances sont calculées d’après une longueur de tubulure de 10 mm.

Remarque : Lors de l’utilisation de solvants en phase normale, installez le kit de conversion hexane/THF de Waters correspondant à votre système. Consultez la rubrique Kits de compatibilité hexane/THF de Waters.

Attention : Lorsque vous utilisez le Système Alliance iS Bio HPLC à un pH supérieur à 10, veillez à utiliser le kit pour pH basique en option. Pour obtenir de l’aide, contactez Waters.

Tableau 1. Mesure de l'absorbance d'une phase mobile par rapport à l'air ou à l'eau
Phase mobile	Absorbance, en AU, à une longueur d'onde donnée, en nm
Phase mobile	200	205	210	215	220	230	240	250	260	280
Solvants
ACN	0,05	0,03	0,02	0,01	0,01	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet
IPA	1,80	0,68	0,34	0,24	0,19	0,08	0,04	0,03	0,02	0,02
MeOH (dégazé)	1,91	0,76	0,35	0,21	0,15	0,06	0,02	< 0,01	Sans objet	Sans objet
MeOH (non dégazé)	2,06	1,00	0,53	0,37	0,24	0,11	0,05	0,02	< 0,01	Sans objet
THF non stabilisé (frais)	2,44	2,57	2,31	1,80	1,54	0,94	0,42	0,21	0,09	0,05
THF non stabilisé (ancien)	>2,5	>2,5	>2,5	>2,5	>2,5	>2,5	>2,5	>2,5	2,5	1,45
Acides et bases
Acide acétique, 1 %	2,61	2,63	2,61	2,43	2,17	0,87	0,14	0,01	< 0,01	Sans objet
Phosphate de diammonium, 50 mM	1,85	0,67	0,15	0,02	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet
EDTA disodique, 1 mM	0,11	0,07	0,06	0,04	0,03	0,03	0,02	0,02	0,02	0,02
Acide chlorhydrique, 0,1 %	0,11	0,02	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet
Acide phosphorique, 0,1 %	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet
Triéthylamine, 1 %	2,33	2,42	2,50	2,45	2,37	1,96	0,50	0,12	0,04	< 0,01
Acide trifluoroacétique, 0,1 %	1,20	0,78	0,54	0,34	0,22	0,06	< 0,02	< 0,01	Sans objet	Sans objet
Tampons et sels
Acétate d'ammonium, 10 mM	1,88	0,94	0,53	0,29	0,15	0,02	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet
Bicarbonate d'ammonium, 10 mM	0,41	0,10	0,01	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet
HEPES, 10 mM, pH 7,6	2,45	2,50	2,37	2,08	1.50	0,29	0,03	< 0,01	Sans objet	Sans objet
MES, 10 mM, pH 6,0	2,42	2,38	1,89	0,90	0,45	0,06	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet
Phosphate de potassium, dibasique (K₂HPO₄), 10 mM	0,53	0,16	0,05	0,01	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet
Phosphate de potassium, monobasique (KH₂PO₄), 10 mM	0,03	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet
Acétate de sodium, 10 mM	1,85	0,96	0,52	0,30	0,15	0,03	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet
Chlorure de sodium, 1 M	2,00	1,67	0,40	0,10	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet
Citrate de sodium, 10 mM	2,48	2,84	2,31	2,02	1,49	0,54	0,12	0,03	0,02	0,01
Formiate de sodium, 10 mM	1,00	0,73	0,53	0,33	0,20	0,03	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet
Phosphate de sodium, 100 mM, pH 6,8	1,99	0,75	0,19	0,06	0,02	0,01	0,01	0,01	0,01	< 0,01
Tris HCl, 20 mM, pH 7,0	1,40	0,77	0,28	0,10	0,04	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet
Tris HCl, 20 mM, pH 8,0	1,80	1,90	1,11	0,43	0,13	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet
Tensioactifs
Brij 35, 1 %	0,06	0,03	0,02	0,02	0,02	0,01	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet
CHAPS, 0,1 %	2,40	2,32	1,48	0,80	0,40	0,08	0,04	0,02	0,02	0,01
Monolaurate de polyoxyéthylène sorbitane (Tween 20), 0,1 %	0,21	0,14	0,11	0,10	0,09	0,06	0,05	0,04	0,04	0,03
Dodécylsulfate de sodium (SDS), 0,1 %	0,02	0,01	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet
Triton X-100, 0,1 %	2,48	2,50	2,43	2,42	2,37	2,37	0,50	0,25	0,67	1,42
Réactifs PIC de Waters
PIC A, 1 flacon/L	0,67	0,29	0,13	0,05	0,03	0,02	0,02	0,02	0,02	< 0,01
PIC B6, 1 flacon/L	2,46	2,50	2,42	2,25	1,83	0,63	0,07	< 0,01	Sans objet	Sans objet
PIC B6, UV faible, 1 flacon/L	0,01	< 0,01	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet	Sans objet
PIC D4, 1 flacon/L	0,03	0,03	0,03	0,03	0,02	0,02	0,02	0,02	0,02	0,01

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