Consultar esta tabla para obtener las absorbancias a diferentes longitudes de onda para las fases móviles más utilizadas.
Para reducir el ruido de la línea base, elegir la fase móvil con cuidado.
La mejor fase móvil para una aplicación es transparente a las longitudes de onda de detección elegidas. Una fase móvil de estas características garantiza que cualquier absorbancia sea atribuible únicamente a la muestra. La absorbancia de la fase móvil también reduce el rango dinámico lineal del detector en la cantidad de absorbancia que resta la función Autozero (Puesta a cero automática). La longitud de onda, el pH y la concentración de la fase móvil afectan a su absorbancia. En la siguiente tabla se muestran ejemplos de varias fases móviles, donde las absorbancias se basan en un camino óptico de 10 mm.
Atención: Cuando se utilice Alliance iS Bio HPLC System a un pH superior a 10, asegurarse de utilizar el kit opcional para pH alto. Para obtener asistencia adicional, ponerse en contacto con Waters.
Tabla 1.
Absorbancia de la fase móvil medida con referencia a aire o agua
| Fase móvil |
Absorbancia (AU) a la longitud de onda especificada (nm) |
| 200 |
205 |
210 |
215 |
220 |
230 |
240 |
250 |
260 |
280 |
| Eluyentes |
| ACN |
0,05 |
0,03 |
0,02 |
0,01 |
0,01 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
| IPA |
1,80 |
0,68 |
0,34 |
0,24 |
0,19 |
0,08 |
0,04 |
0,03 |
0,02 |
0,02 |
| MeOH (desgasificado) |
1,91 |
0,76 |
0,35 |
0,21 |
0,15 |
0,06 |
0,02 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
| MeOH (no desgasificado) |
2,06 |
1,00 |
0,53 |
0,37 |
0,24 |
0,11 |
0,05 |
0,02 |
< 0,01 |
N/A |
| THF no estabilizado (fresco) |
2,44 |
2,57 |
2,31 |
1,80 |
1,54 |
0,94 |
0,42 |
0,21 |
0,09 |
0,05 |
| THF no estabilizado (antiguo) |
>2,5 |
>2,5 |
>2,5 |
>2,5 |
>2,5 |
>2,5 |
>2,5 |
>2,5 |
2,5 |
1,45 |
| Ácidos y bases |
| Ácido acético, 1 % |
2,61 |
2,63 |
2,61 |
2,43 |
2,17 |
0,87 |
0,14 |
0,01 |
< 0,01 |
N/A |
| Fosfato diamónico, 50 mM |
1,85 |
0,67 |
0,15 |
0,02 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
| EDTA disódico, 1 mM |
0,11 |
0,07 |
0,06 |
0,04 |
0,03 |
0,03 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
| Ácido clorhídrico, 0,1 % |
0,11 |
0,02 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
| Ácido fosfórico, 0,1 % |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
| Trietilamina, 1 % |
2,33 |
2,42 |
2,50 |
2,45 |
2,37 |
1,96 |
0,50 |
0,12 |
0,04 |
< 0,01 |
| Ácido trifluoroacético, 0,1 % |
1,20 |
0,78 |
0,54 |
0,34 |
0,22 |
0,06 |
<0,02 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
| Tampones y sales |
| Acetato de amonio, 10 mM |
1,88 |
0,94 |
0,53 |
0,29 |
0,15 |
0,02 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
| Bicarbonato de amonio, 10 mM |
0,41 |
0,10 |
0,01 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
| HEPES, 10 mM, pH 7,6 |
2,45 |
2,50 |
2,37 |
2,08 |
1,50 |
0,29 |
0,03 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
| MES, 10 mM, pH 6,0 |
2,42 |
2,38 |
1,89 |
0,90 |
0,45 |
0,06 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
| Fosfato potásico, dibásico, (K2HPO4), 10 mM |
0,53 |
0,16 |
0,05 |
0,01 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
| Fosfato potásico, monobásico (KH2PO4), 10 mM |
0,03 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
| Acetato de sodio, 10 mM |
1,85 |
0,96 |
0,52 |
0,30 |
0,15 |
0,03 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
| Cloruro sódico, 1 M |
2,00 |
1,67 |
0,40 |
0,10 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
| Citrato de sodio, 10 mM |
2,48 |
2,84 |
2,31 |
2,02 |
1,49 |
0,54 |
0,12 |
0,03 |
0,02 |
0,01 |
| Formiato de sodio, 10 mM |
1,00 |
0,73 |
0,53 |
0,33 |
0,20 |
0,03 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
| Fosfato de sodio, 100 mM, pH 6,8 |
1,99 |
0,75 |
0,19 |
0,06 |
0,02 |
0,01 |
0,01 |
0,01 |
0,01 |
< 0,01 |
| Tris HCl, 20 mM, pH 7,0 |
1,40 |
0,77 |
0,28 |
0,10 |
0,04 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
| Tris HCl, 20 mM, pH 8,0 |
1,80 |
1,90 |
1,11 |
0,43 |
0,13 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
| Surfactantes |
|
| Brij 35, 1 % |
0,06 |
0,03 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,01 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
| CHAPS, 0,1 % |
2,40 |
2,32 |
1,48 |
0,80 |
0,40 |
0,08 |
0,04 |
0,02 |
0,02 |
0,01 |
| Monolaurato de sorbitano polioxietileno (Tween 20), 0,1 % |
0,21 |
0,14 |
0,11 |
0,10 |
0,09 |
0,06 |
0,05 |
0,04 |
0,04 |
0,03 |
| Dodecilsulfato de sodio (SDS), 0,1 % |
0,02 |
0,01 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
| Triton X-100, 0,1 % |
2,48 |
2,50 |
2,43 |
2,42 |
2,37 |
2,37 |
0,50 |
0,25 |
0,67 |
1,42 |
| Reactivos PIC de Waters |
| PIC A, 1 vial/L |
0,67 |
0,29 |
0,13 |
0,05 |
0,03 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
< 0,01 |
| PIC B6, 1 vial/L |
2,46 |
2,50 |
2,42 |
2,25 |
1,83 |
0,63 |
0,07 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
| PIC B6, UV baja, 1 vial/L |
0,01 |
< 0,01 |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
N/A |
| PIC D4, 1 vial/L |
0,03 |
0,03 |
0,03 |
0,03 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,01 |
Valores de corte de la longitud de onda para fases móviles mezcladas
