Para reducir el riesgo de arrastre, seguir estas directrices sobre los eluyentes de lavado.
Los eluyentes de lavado limpian la aguja de muestras entre inyecciones y eliminan los restos de la muestra anterior. Suelen ser más fuertes que una fase móvil isocrática de la aplicación, y con frecuencia son iguales (o incluso más fuertes) que las condiciones finales de la fase móvil de una separación por gradiente. Dado que no se inyectan en la columna, la determinación del eluyente de lavado adecuado no requiere, para fines prácticos, consideraciones cromatográficas.
Para conseguir un funcionamiento óptimo, seguir estas pautas a la hora de seleccionar los eluyentes de lavado. De lo contrario, se puede incrementar el riesgo de arrastre. No obstante, estas directrices no prohíben todas las demás combinaciones de eluyentes, que pueden utilizarse con peores expectativas en cuanto a rendimiento o manipulando los parámetros de inyección.
Nota: Para evitar dañar y obstruir los componentes de la trayectoria del flujo de lavado y purga, se recomienda no utilizar soluciones tampón ni aditivos no volátiles como eluyentes de lavado.
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Importante: Los eluyentes de lavado deben ser compatibles y miscibles tanto con la fase móvil de la aplicación como con los componentes de la muestra. También deben ser completamente solubles con la fase móvil y la muestra y no deben provocar precipitación.
Se recomienda utilizar eluyentes de lavado basados en la composición química de la fase móvil y de la muestra de la aplicación.
- Los eluyentes de lavado deben ser lo suficientemente fuertes como para disolver fácilmente la muestra y, posteriormente, mantener la solubilidad.
- Para condiciones cromatográficas de fase reversa con soluciones acuosas tamponadas, se suele utilizar eluyente de lavado con una alta concentración de eluyente orgánico, como MeOH o ACN al 80-100 % con el resto de agua.
Nota: El titanio está sujeto a corrosión en metanol anhidro, lo que se puede evitar añadiendo una pequeña cantidad de agua (aproximadamente un 3 %). Es posible una ligera corrosión cuando los porcentajes de amoníaco son superiores al 10%. Al usar un Alliance iS Bio HPLC System, como alternativa, se pueden extraer los filtros sumergibles de titanio (el sistema pierde la primera línea de protección frente a partículas) o sustituirlos por filtros de acero inoxidable si el análisis no se ve afectado por consideraciones de biocompatibilidad.
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Recomendaciones sobre los eluyentes
