流动相吸光度

流动相吸光度
Topic LCI-USG-0021, Last Updated 11/21/2024

请参阅下表,查看常用流动相在多个波长处的吸光度。

为了降低基线噪音,请谨慎选择流动相。

最适用的流动相是在选定检测波长处为透明的流动相。使用这种流动相,可确保任何吸光度只和样品有关。流动相的吸光度还会降低检测器的线性动态范围,减少量为“自动复零”功能所抵消的光吸收量。流动相的波长、pH 和浓度会影响其吸光度。下表中给出了几个流动相的示例,其中的吸光度基于 10 mm 的光程。

注: 运行正相溶剂时,请安装系统适用的 Waters 己烷/THF 转换套件(请参阅 Waters 己烷/THF 兼容性套件)。
注意: 如果要在 pH 高于 10 的条件下运行 Alliance iS Bio HPLC System,请务必使用可选的高 pH 套件。如需更多帮助,请联系 Waters。
表 1. 根据空气或水测量出的流动相吸光度
流动相 指定波长 (nm) 处的吸光度 (AU)
200 205 210 215 220 230 240 250 260 280
溶剂
ACN 0.05 0.03 0.02 0.01 0.01 < 0.01 N/A N/A N/A N/A
IPA 1.80 0.68 0.34 0.24 0.19 0.08 0.04 0.03 0.02 0.02
甲醇(已脱气) 1.91 0.76 0.35 0.21 0.15 0.06 0.02 < 0.01 N/A N/A
甲醇(未脱气) 2.06 1.00 0.53 0.37 0.24 0.11 0.05 0.02 < 0.01 N/A
不含稳定剂的 THF(现制) 2.44 2.57 2.31 1.80 1.54 0.94 0.42 0.21 0.09 0.05
不含稳定剂的 THF(旧制) > 2.5 > 2.5 > 2.5 > 2.5 > 2.5 > 2.5 > 2.5 > 2.5 2.5 1.45
酸和碱
乙酸,1% 2.61 2.63 2.61 2.43 2.17 0.87 0.14 0.01 < 0.01 N/A
磷酸氢二铵,50 mM 1.85 0.67 0.15 0.02 < 0.01 N/A N/A N/A N/A N/A
EDTA 二钠,1 mM 0.11 0.07 0.06 0.04 0.03 0.03 0.02 0.02 0.02 0.02
盐酸,0.1% 0.11 0.02 < 0.01 N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
磷酸,0.1% < 0.01 N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
三乙胺,1% 2.33 2.42 2.50 2.45 2.37 1.96 0.50 0.12 0.04 < 0.01
三氟乙酸,0.1% 1.20 0.78 0.54 0.34 0.22 0.06 < 0.02 < 0.01 N/A N/A
缓冲液和盐
醋酸铵,10 mM 1.88 0.94 0.53 0.29 0.15 0.02 < 0.01 N/A N/A N/A
碳酸氢铵,10 mM 0.41 0.10 0.01 < 0.01 N/A N/A N/A N/A N/A N/A
HEPES,10 mM,pH 7.6 2.45 2.50 2.37 2.08 1.50 0.29 0.03 < 0.01 N/A N/A
MES,10 mM,pH 6.0 2.42 2.38 1.89 0.90 0.45 0.06 < 0.01 N/A N/A N/A
磷酸钾,二元碱,(K2HPO4),10 mM 0.53 0.16 0.05 0.01 < 0.01 N/A N/A N/A N/A N/A
磷酸钾,一元碱 (KH2PO4),10 mM 0.03 < 0.01 N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
乙酸钠,10 mM 1.85 0.96 0.52 0.30 0.15 0.03 < 0.01 N/A N/A N/A
氯化钠,1 M 2.00 1.67 0.40 0.10 < 0.01 N/A N/A N/A N/A N/A
柠檬酸钠,10 mM 2.48 2.84 2.31 2.02 1.49 0.54 0.12 0.03 0.02 0.01
甲酸钠,10 mM 1.00 0.73 0.53 0.33 0.20 0.03 < 0.01 N/A N/A N/A
磷酸钠,100 mM,pH 6.8 1.99 0.75 0.19 0.06 0.02 0.01 0.01 0.01 0.01 < 0.01
Tris HCl,20 mM,pH 7.0 1.40 0.77 0.28 0.10 0.04 < 0.01 N/A N/A N/A N/A
Tris HCl,20 mM,pH 8.0 1.80 1.90 1.11 0.43 0.13 < 0.01 N/A N/A N/A N/A
表面活性剂
Brij 35,1% 0.06 0.03 0.02 0.02 0.02 0.01 < 0.01 N/A N/A N/A
CHAPS,0.1% 2.40 2.32 1.48 0.80 0.40 0.08 0.04 0.02 0.02 0.01
聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯 (Tween 20),0.1% 0.21 0.14 0.11 0.10 0.09 0.06 0.05 0.04 0.04 0.03
十二烷基硫酸钠 (SDS),0.1% 0.02 0.01 < 0.01 N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
Triton X-100,0.1% 2.48 2.50 2.43 2.42 2.37 2.37 0.50 0.25 0.67 1.42
Waters PIC 试剂
PIC A,1 样品瓶/L 0.67 0.29 0.13 0.05 0.03 0.02 0.02 0.02 0.02 < 0.01
PIC B6,1 样品瓶/L 2.46 2.50 2.42 2.25 1.83 0.63 0.07 < 0.01 N/A N/A
PIC B6,低 UV,1 样品瓶/L 0.01 < 0.01 N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
PIC D4,1 样品瓶/L 0.03 0.03 0.03 0.03 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.01

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