In dieser Tabelle finden Sie die Absorptionswerte bei verschiedenen Wellenlängen für die gängigen mobilen Phasen.
Wählen Sie die mobile Phase sorgfältig aus, um das Basislinienrauschen zu reduzieren.
Die für Ihre Applikation optimale mobile Phase sollte bei den ausgewählten Detektionswellenlängen keine Absorption zeigen. Damit stellen Sie sicher, dass die Absorption vollständig auf die Probe zurückgeführt werden kann. Eine Absorption der mobilen Phase reduziert außerdem den linearen dynamischen Bereich des Detektors um genau die Absorption, die über die Autozero-Funktion bei der Durchführung des automatischen Nullabgleichs korrigiert wird. Die Absorption der mobilen Phase wird von der Wellenlänge, dem pH-Wert und der Konzentration der mobilen Phase beeinflusst. In der nachstehenden Tabelle sind Beispiele für mehrere mobile Phasen aufgeführt, bei denen die Absorption auf einer 10-mm-Pfadlänge basiert.
Achtung: Wenn Sie das Alliance iS Bio HPLC System über einem pH-Wert von 10 betreiben, sollten Sie sicherstellen, dass Sie das optionale Kit für hohe pH-Werte verwenden. Wenden Sie sich für weitere Unterstützung an Waters.
Tabelle 1.
Gegen Luft oder Wasser gemessene Absorption der mobilen Phase
| Mobile Phase |
Absorption (AU) bei einer bestimmten Wellenlänge (nm) |
| 200 |
205 |
210 |
215 |
220 |
230 |
240 |
250 |
260 |
280 |
| Lösungsmittel |
| ACN |
0,05 |
0,03 |
0,02 |
0,01 |
0,01 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| IPA |
1,80 |
0,68 |
0,34 |
0,24 |
0,19 |
0,08 |
0,04 |
0,03 |
0,02 |
0,02 |
| MeOH (entgast) |
1,91 |
0,76 |
0,35 |
0,21 |
0,15 |
0,06 |
0,02 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
| MeOH (nicht entgast) |
2,06 |
1,00 |
0,53 |
0,37 |
0,24 |
0,11 |
0,05 |
0,02 |
< 0,01 |
k. A. |
| Nicht stabilisiertes THF (frisch) |
2,44 |
2,57 |
2,31 |
1,80 |
1,54 |
0,94 |
0,42 |
0,21 |
0,09 |
0,05 |
| Nicht stabilisiertes THF (alt) |
> 2,5 |
> 2,5 |
> 2,5 |
> 2,5 |
> 2,5 |
> 2,5 |
> 2,5 |
> 2,5 |
2,5 |
1,45 |
| Säuren und Basen |
| Essigsäure, 1 % |
2,61 |
2,63 |
2,61 |
2,43 |
2,17 |
0,87 |
0,14 |
0,01 |
< 0,01 |
k. A. |
| Diammoniumphosphat, 50 mM |
1,85 |
0,67 |
0,15 |
0,02 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| Dinatrium-EDTA, 1 mM |
0,11 |
0,07 |
0,06 |
0,04 |
0,03 |
0,03 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
| Salzsäure, 0,1 % |
0,11 |
0,02 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| Phosphorsäure, 0,1 % |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| Triethylamin, 1 % |
2,33 |
2,42 |
2,50 |
2,45 |
2,37 |
1,96 |
0,50 |
0,12 |
0,04 |
< 0,01 |
| Trifluoressigsäure, 0,1 % |
1,20 |
0,78 |
0,54 |
0,34 |
0,22 |
0,06 |
< 0,02 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
| Puffer und Salze |
| Ammoniumacetat, 10 mM |
1,88 |
0,94 |
0,53 |
0,29 |
0,15 |
0,02 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| Ammoniumbicarbonat, 10 mM |
0,41 |
0,10 |
0,01 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| HEPES, 10 mM, pH 7,6 |
2,45 |
2,50 |
2,37 |
2,08 |
1,50 |
0,29 |
0,03 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
| MES, 10 mM, pH 6,0 |
2,42 |
2,38 |
1,89 |
0,90 |
0,45 |
0,06 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| Kaliumphosphat, zweibasisch, (K2HPO4), 10 mM |
0,53 |
0,16 |
0,05 |
0,01 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| Kaliumphosphat, einbasisch (KH2PO4), 10 mM |
0,03 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| Natriumacetat, 10 mM |
1,85 |
0,96 |
0,52 |
0,30 |
0,15 |
0,03 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| Natriumchlorid, 1 M |
2,00 |
1,67 |
0,40 |
0,10 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| Natriumcitrat, 10 mM |
2,48 |
2,84 |
2,31 |
2,02 |
1,49 |
0,54 |
0,12 |
0,03 |
0,02 |
0,01 |
| Natriumformiat, 10 mM |
1,00 |
0,73 |
0,53 |
0,33 |
0,20 |
0,03 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| Natriumphosphat,100 mM, pH 6,8 |
1,99 |
0,75 |
0,19 |
0,06 |
0,02 |
0,01 |
0,01 |
0,01 |
0,01 |
< 0,01 |
| Tris HCl, 20 mM, pH 7,0 |
1,40 |
0,77 |
0,28 |
0,10 |
0,04 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| Tris HCl, 20 mM, pH 8,0 |
1,80 |
1,90 |
1,11 |
0,43 |
0,13 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| Tenside |
|
| Brij 35, 1 % |
0,06 |
0,03 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,01 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| CHAPS, 0,1 % |
2,40 |
2,32 |
1,48 |
0,80 |
0,40 |
0,08 |
0,04 |
0,02 |
0,02 |
0,01 |
| Polyoxyethylensorbitanmonolaurat (Tween 20), 0,1 % |
0,21 |
0,14 |
0,11 |
0,10 |
0,09 |
0,06 |
0,05 |
0,04 |
0,04 |
0,03 |
| Natriumdodecylsulfat (SDS), 0,1 % |
0,02 |
0,01 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| Triton X-100, 0,1 % |
2,48 |
2,50 |
2,43 |
2,42 |
2,37 |
2,37 |
0,50 |
0,25 |
0,67 |
1,42 |
| Waters PIC-Reagenzien |
| PIC A, 1 Vial/L |
0,67 |
0,29 |
0,13 |
0,05 |
0,03 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
< 0,01 |
| PIC B6, 1 Vial/Liter |
2,46 |
2,50 |
2,42 |
2,25 |
1,83 |
0,63 |
0,07 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
| PIC B6, low UV, 1 Vial/L |
0,01 |
< 0,01 |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
k. A. |
| PIC D4, 1 Vial/L |
0,03 |
0,03 |
0,03 |
0,03 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,02 |
0,01 |
Grenzwellenlängen gemischter mobiler Phasen
